【分离蛋白】一、基本原理蛋白质的分离纯化，首先要从原料中提取目的蛋白，然后通过粗分离去除大量杂质，最后进行细分离得到目的蛋白。【分离蛋白】

本实验以一种新型重组人肿瘤坏死因子为例，阐述了重组蛋白肿瘤坏死因子的提取和初步分离。【分离蛋白】he的提取是将发酵细菌裂解，在一定条件和溶液下充分释放提取的TNF，离心收集混合溶液中提取的TNF成分的过程。

含有肿瘤坏死因子的提取液含有大量的外源蛋白【分离蛋白】。由于蛋白质在水溶液中的溶解度主要取决于蛋白质分子表面的水分子数，即亲水基团和水分子在蛋白质表面形成的水合膜的程度和带电情况，所以当蛋白质溶液中加入硫酸铵等中性盐时，中【分离蛋白】性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，削弱或消失了蛋白质分子周围的水合膜，降低了蛋白质的溶解度。同时，由于中性盐的加入，蛋白质溶液的离子强度发生变化，蛋白质表面电荷被大量中和，导致蛋白质溶解度降低，蛋白质分子聚集沉淀。

不同的蛋白质由于带电和亲水性等性质不同，在不同浓度的盐中会形成沉淀。根据这个原理【分离蛋白】，可以对混合蛋白进行粗略的分离。本实验采用硫酸铵盐析法去除大部分外源蛋白，【分离蛋白】从而初步纯化肿瘤坏死因子。

ii。试剂制备1。STE(25%蔗糖/升三盐酸，pH8.5 1摩尔/升乙二胺四乙酸)。

方法取蔗糖250g，1mol/。，0 2、1摩尔/升氯化镁.方法取

20、【分离蛋白】

3、pH8.5.方法Tris

12、tris，用HCL调pH至8(/L HCl约30ml)。

4、0方法取乙二胺四乙酸二钠

18、iii.操作步骤

1、称取菌体，按5~10毫升/克菌体加入ste溶液，【分离蛋白】搅拌至菌体完全悬浮。

2、按0.5~1毫克/克菌体加入用STE溶液新鲜配制的溶菌酶溶液，用玻璃棒搅拌，然后在4℃放置20分钟。

此时的菌液是粘稠的。

3、加入用STE溶液按10毫克/克菌体新配制的脱氧胆酸钠溶液，【分离蛋白】剧烈搅拌。

4、加入5~10毫升1摩尔/升氯化镁溶液，搅拌均匀，然后加入约40微升I(25毫克/毫升)，搅拌均匀，直至菌液变稀。

在5，4℃下离心30分钟。

6、取离心上清液，准确测量其体积，测量蛋白质浓度，倒入置于冰浴中的烧杯中【分离蛋白】，边搅拌边缓慢加入固体硫酸铵，使其达到50%饱和度。

固体硫酸铵安全溶解后，放入0℃30分钟。7。4℃离心30分钟。

取离心上清液，测量其体积，并测量蛋白质浓度。

8、将离心后的上清液放入透析袋中，在4℃搅拌下用tris-HCl(ph8)和EDTA(1mol/l)溶液透析。

iv【分离蛋白】

1、加入硫酸铵，无论是固体硫酸铵还是饱和硫酸铵溶液，边加入边搅拌。

2、加入硫酸铵应该慢，因为太快会导致蛋白质共沉淀。

加入固体硫酸铵时，应事先磨成粉末，加入饱和硫酸铵溶液时，【分离蛋白】应逐滴加入。

3、缓慢剧烈搅拌，蛋白质溶液容易起泡，由于表面张力效应会引起蛋白质变性。

大豆蛋白即大豆制品中所含的蛋白质，含量在38%左右或以上，【分离蛋白】是谷类的4-5倍。大豆蛋白是一种植物蛋白。

大豆蛋白是一种植物蛋白，其氨基酸组成与乳蛋白相似。除蛋氨酸略低外，其他必需氨基酸丰富【分离蛋白】，是一种完整的植物蛋白。

从营养价值来说，相当于动物蛋白，也是基因结构上最接近人体的氨基酸，所以是最有营养的植物蛋白。【分离蛋白】大豆蛋白具有动物蛋白无法比拟的优势。

虽然大豆蛋白含有很少的m【分离蛋白】