【过氧化氢酶活性测定】过氧化氢酶的活性测定——紫外吸收法【原理】H2O2在240nm的波长下有很强的吸收【过氧化氢酶活性测定】，过氧化氢酶分解过氧化氢，使反应溶液的吸光度(A240)随着反应时间下降。

通过测定吸光度的变化速度可以测定过氧化氢酶的活性。【过氧化氢酶活性测定】【仪器和器具】紫外分光光度计

离心分离机

擂钵

一个250ml容量瓶【过氧化氢酶活性测定】

2根0.5ml刻度吸管，1根2ml刻度吸管

三根10ml试管

恒温水浴【过氧化氢酶活性测定】

【试剂】0.2mol/L pH7.8磷酸缓冲液(含1%聚乙烯吡咯烷酮)

0.1 mol/lh2o2(用0.1 mol/l高锰酸钾标定)【过氧化氢酶活性测定】

【方法】1.酶液的提取：

取新鲜小麦叶和其他植物组织0.5g放入研钵中，【过氧化氢酶活性测定】加入4预冷的pH7.0磷酸缓冲液25ml和少量的石英砂研磨成匀浆后，移至25ml的瓶子中，用缓冲液清洗研钵数次，将清洗液合在一起定容成刻度。

混合均匀地将量瓶在5的冰箱中静置10分钟，将上部澄清液以4000rpm离心15分钟，【过氧化氢酶活性测定】将上清液作为过氧化氢酶粗提取液。在5下保存。

2.测量：

采集3根试管10ml，其中2根作为样品测定管，1根作为毛坯管，【过氧化氢酶活性测定】按照表40-2的顺序加入试剂。

表40-2利用紫外吸收法测定H2O2样品液配置表管编号S1S2S3粗酶液(ml)0.20.20.2pH7.8磷酸(ML)1.5~1.5蒸馏水(ml)1.01

2.每次装管就记住，放在石英比色杯里，用240nm测量吸光度，每隔1min读取一次，共计测量4min，【过氧化氢酶活性测定】三根管全部测量后，用下式计算酶活性。

3.结果计算：

1分钟内A240减少0.1的酶量作为1酶活性单元(u)。

过氧化氢酶活性(u/gFW/min)=式中A240=AS0-AS0—加入煮死酶液的对照管吸光值；

AS

1，AS2—样品管吸光值

vt-粗酶提取液的总体积(ml)

v1-测定用粗酶液的体积(ml)

fw-样品鲜重(g)

0.1—A240每下降0.1个酶活性单元(u)

加入t-过氧化氢直到最后读取时间(min)。