【l15培养基】不管现有资料中是否提到影响，【l15培养基】遵循科学研究规范都应该遵循单一变量，否则就不能接受。

一、MTT比色法测定细胞活性(一)原理活细胞内的线粒体琥珀酸脱氢酶可以催化无色MTT形成蓝色甲胤，【l15培养基】其形成量与活细胞数量和功能状态成正相关。【l15培养基】

影响细胞活力的表达蛋白活性的检测可以通过MTT比色法进行。

(二)试剂准备

1.青链霉素溶液(100X):【l15培养基】

溶解于青霉素100万u、链霉素100万u、100mlddH2O中，抽吸过滤除菌。

2、L15基础培养基：【l15培养基】

加入1000mlL15培养基、碳酸氢钠2g、100x花青链霉素10ml、hepes5ml。

3、MTT液：【l15培养基】

5mg/ml溶解在L15基础培养基中。

4.sds处理液：

加入sds20g、二甲基甲酰胺50l、【l15培养基】蒸馏水50ml后溶解。

5、L-多晶硅：

50g溶解在1ml的双蒸馏水中。【l15培养基】

6、L15基础培养基中溶解的不同浓度的蛋白液。

(3)操作步骤(以背根神经节细胞培养为例)

1.无菌条件下采集新生1天的SD大鼠背根神经节(DRG)。

2.镜下除神经根和外膜外，【l15培养基】在37下在1 ml 0.1%胶原酶消化30分钟，每5min振荡一次。

3.洗掉胶原酶，吹散分散后，接种预先涂上L-多晶硅的96孔培养板，每孔含有100l的无血清L15培养基，细胞约800个。

4.实验组分别加入纯化的表达蛋白(各不相同的蛋白浓度)，阴性对照加入等体积表达蛋白的溶剂。

5，37 5%CO2培养48hr后，【l15培养基】每孔加入10l MTT，375%CO2孵化4hr。

加入100l 6.20%SDS处理液，在37孵育20hr。

用EL800微孔酶标记测定OD570的值，进行数据分析。