【质粒dna的提取】不是我原创，转载自网络。

仔细看。应注意质粒提取。

溶液I，

5、mM葡萄糖/

2、mM/

1、mM乙二胺四乙酸，pH8.0

溶液二，【质粒dna的提取】

0、

2、NaOH/

1、SDS

溶液三，【质粒dna的提取】3 M醋酸钾/2 M醋酸。

让我们首先看看解决方案I的效果..在任何生化反应中，都需要先控制溶液的pH值，【质粒dna的提取】所以使用适当浓度和pH值的Tris-Cl溶液是很自然的。那么

5、mM葡萄糖是干什么的呢？

难以置信地说，添加葡萄糖最大的好处就是悬浮的大肠杆菌不会很快沉积在试管底部。

因此，如果溶液I中没有葡萄糖，对质粒提取本身几乎没有影响。【质粒dna的提取】所以，溶液I中的葡萄糖是必不可少的。而EDTA呢？

众所周知，EDTA是Ca2+、Mg2+等二价金属离子的螯合剂，在分子生物试剂中的主要作用是抑制的活性，抑制微生物的生长。

在溶液I中加入高达

1、mM的EDTA，无非是螯合大肠杆菌细胞中所有的二价金属离子。

其实如果不加EDTA，也没什么大不了的。只要在短时间内完成质粒提取，就不需要害怕DNA被快速降解，因为最终溶解质粒的TE缓冲液中含有EDTA。

如果有一天刚好缺溶液I，可以提取质粒吗？

说实话，用等体积的水或者LB培养基悬浮细菌就可以了。【质粒dna的提取】有一点不能忘记，就是菌体一定要悬浮均匀，不能结块。解决方案二的时间到了。

将新鲜的0.4 N氢氧化钠和2%十二烷基硫酸钠等体积混合后使用。浓NaOH稀释制取

0、

4、NaOH的目的是为了保证NaOH不吸收空气中的CO2，削弱碱度。

很多人不知道是碱而不是SDS破坏了细胞，所以叫碱提取。

事实上，氢氧化钠是溶解细胞的最佳试剂。无论是大肠杆菌还是哺乳动物细胞【质粒dna的提取】，与碱接触几乎瞬间就会溶解，这是细胞膜从(双膜)结构向(微胶囊)结构相变造成的。用陈腐的0.4 N NaOH，即使用SDS也不能有效溶解大肠杆菌(自己试试)，很难高效提取质粒。

当然，如果只用SDS，可以提取少量质粒，因为SDS也是碱性的，只是弱了一点。很多人误以为NaOH的作用是使基因组DNA变性沉淀，这是由于没有正确理解某些书籍中对DNA变性复性的描述所致。有人不禁要问，既然细胞是被NaOH溶解的，【质粒dna的提取】为什么还要加入SDS？

那就是为下一步行动做铺垫。

这一步要记住两点第一，时间不能太长。这个时候千万不要接电话【质粒dna的提取】，因为基因组DNA片段在这样的碱性条件下会慢慢断裂

其次，一定要轻轻混合(像女生一样)，否则基因组DNA会断裂。基因组DNA断裂会带来麻烦，后面我会详细解释。

大家都知道加入溶液III后会有大量沉淀，但大多数人并不了解这种沉淀的本质。最常见的误解是SDS遇到酸性时的沉淀。如果您对此有疑问，请将2M醋酸溶液添加到1%的SDS溶液中，以了解情况并非如此。

大量沉淀物的出现显然与SDS的加入有关【质粒dna的提取】。如果不在解决方案二中加入SDS会怎么样？

会有少量沉淀，但量少很多，显然是盐析和酸变性沉淀的蛋白质。既然SDS不是酸沉淀的，那盐能沉淀吗？

在1%的SDS溶液中慢慢加入5 N NaCl，你会发现SDS在高盐浓度下会沉淀。

因此，盐的高浓度导致了SDS的沉淀。但是如果你加入KCl而不是氯化钠，你会发现降水量要多得多。【质粒dna的提取】实际上十二烷基硫酸钠()遇到钾离子后变成了十二烷基硫酸钾(，PDS)，PDS不溶于水，所以发生沉淀。

从这个角度来说，加入溶液III后的沉淀是钾离子取代了SDS中的钠离子，形成不溶性的PDS，高浓度的盐使沉淀更加彻底。众所周知，SDS特别喜欢和蛋白质结合，平均两个氨基酸和一个SDS分子结合。钾、【质粒dna的提取】钠离子置换产生的大量沉淀自然会沉淀大部分【质粒dna的提取】